海藻糖6磷酸酯酶(TPP)測(cè)試盒

商品詳情：
測(cè)定意義：

海藻糖又稱為漏蘆糖、蕈糖，是由兩個(gè)葡萄糖分子組成的一個(gè)非還原性雙糖，能夠在高溫、高寒、高滲透壓及干燥失水等惡劣環(huán)境條件下在細(xì)胞表面形成的保護(hù)膜，有效地保護(hù)生物分子結(jié)構(gòu)不被破壞，從而維持生命體的生命過程和生物特征。

植物體內(nèi)主要以葡萄糖為底物合成海藻糖，海藻糖-6-磷酸酯酶 (trehalose 6-phosphate phosphatase，TPP)是該途徑中海藻糖合成關(guān)鍵酶之一，該反應(yīng)首先在海藻糖-6-磷酸合成酶(trehalose-6-phosphate synthase，TPS)的作用下?杈?

測(cè)定原理：

TPP催化海藻糖-6-磷酸產(chǎn)生海藻糖，同時(shí)釋放出磷酸根，使用鉬銻抗比色法測(cè)定。

需自備的儀器和用品：  

酶標(biāo)儀、水浴鍋、可調(diào)式移液器、96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
樣品中AA提取：

1.按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一）進(jìn)行室溫勻漿，然后轉(zhuǎn)移到1.5 mL EP 管中，蓋緊后（防止水分散失）置于沸水浴提取15 min；自來水冷卻后，8000g，，4℃離心10min，上清液置冰上待測(cè)。

2.細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：試劑一體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL試劑一），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）；8000g，4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。

3.血清等液體：直接檢測(cè)。

計(jì)算公式如下：

1、血清（漿）LAP活力的計(jì)算:

單位的定義：每mL血清（漿）每分鐘生成1 nmol的對(duì)硝基苯胺定義為一個(gè)酶活力單位。

LAP（nmol/min/mL）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷V樣÷T=205.8×ΔA

2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中LAP活力的計(jì)算:

（1）按樣本蛋白濃度計(jì)算：

單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘生成1 nmol 對(duì)硝基苯胺定義為一個(gè)酶活力單位。

LAP（nmol/min /mg prot）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=205.8×ΔA÷Cpr

（2）按樣本鮮重計(jì)算：

單位的定義：每g組織每分鐘生成1 nmol 對(duì)硝基苯胺定義為一個(gè)酶活力單位。

LAP（nmol/min /g 鮮重）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(W× V樣÷V樣總) ÷T=205.8×ΔA÷W

（3）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算：

單位的定義：每1萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘生成1 nmol 對(duì)硝基苯胺定義為一個(gè)酶活力單位。

LAP（nmol/min /104 cell）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(2000×V樣÷V樣總) ÷T=0.103×ΔA

V反總：反應(yīng)體系總體積，2×10-4 L；ε：對(duì)硝基苯胺摩爾消光系數(shù)，9.72×103 L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V樣：加入樣本體積，0.05 mL；V樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應(yīng)時(shí)間，2 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；2000：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，2000萬(wàn)。

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海藻糖6磷酸酯酶(TPP)測(cè)試盒20T/10樣NADPH氧化酶活性測(cè)試盒/比色法

50管/48樣NADP磷酶(NADPase)測(cè)試盒/分光光度法

100管/96樣NADP磷酶(NADPase)測(cè)試盒/微量法

50管/48樣NADP蘋果酶(NADP-ME)測(cè)試盒/分光光度法

100管/96樣NADP蘋果酶(NADP-ME)測(cè)試盒/微量法

50管/48樣NADP-蘋果脫氫酶(NADP－MDH)測(cè)試盒/分光光度法

100管/96樣NADP-蘋果脫氫酶(NADP－MDH)測(cè)試盒/微量法

50T/24樣NAD激酶(NADK)測(cè)試盒/比色法

50管/24樣NAD激酶(NADK)測(cè)試盒/分光光度法
注意事項(xiàng)：

1. 試劑盒中試劑三、試劑四和標(biāo)準(zhǔn)品均需臨用前配制，且避光保存，配制好未使用完的4℃保存且3天內(nèi)使用完畢。

2. 為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，需先取1-2個(gè)樣做預(yù)實(shí)驗(yàn)，如果測(cè)定的吸光值過高（高于2.5），用蒸餾水稀釋后再測(cè)定。

3. 與茚三酮反應(yīng)在570nm處無(wú)吸收峰，因此，570nm處測(cè)定結(jié)果不含這兩種氨基酸的量。

4．檢出限為100μmol/L。