(1)在初級(jí)代謝產(chǎn)物推理育種中的應(yīng)用 利用營(yíng)養(yǎng)缺陷型來(lái)阻斷代謝流或切斷支路代謝.使代謝途徑朝著有益產(chǎn)物合成方向進(jìn)行,還可以解除協(xié)同反饋效應(yīng),以積累支路代謝某一末端產(chǎn)物。
①在直線式生物合成途徑中,營(yíng)養(yǎng)缺陷型不能累積終產(chǎn)物,只能累積中間產(chǎn)物。一個(gè)典型的例子是谷氨酸棒狀桿菌的精氨酸缺陷型突變株進(jìn)行鳥(niǎo)氨酸發(fā)酵。由于合成途徑中酶⑥的缺陷,導(dǎo)致必須供應(yīng)精氨酸和胍氨酸,菌株才能生長(zhǎng)。但這兩種氨基酸的供應(yīng)要維持在亞適量水平,使菌體維持較高水平,而又不引起終產(chǎn)物對(duì)酶②的反饋抑制,從而使鳥(niǎo)氨酸得以大量分泌累積。ELISA試劑盒
②在分支式生物合成途徑中,營(yíng)養(yǎng)缺陷型導(dǎo)致協(xié)同反饋調(diào)節(jié)某一分支代謝途徑的代謝阻斷,使這一途徑的終產(chǎn)物不能合成。例如次黃嘌呤核苷酸(肌苷酸)產(chǎn)生菌是棒狀桿菌和短桿菌的腺嘌呤缺陷菌株,其合成途徑中酶③失活,控制*補(bǔ)給腺嘌呤核苷酸,可解除腺嘌呤核苷酸對(duì)酶①的反饋調(diào)節(jié),由于腺嘌呤核苷酸和鳥(niǎo)嘌呤核昔酸對(duì)酶①是協(xié)同反饋調(diào)節(jié),故代謝流偏向鳥(niǎo)嘌呤核苷酸這一分支途徑。但鳥(niǎo)嘌呤核苷酸對(duì)酶②有反饋抑制和反饋?zhàn)瓒糇饔?,故肌苷酸得以分泌累積達(dá)12.8g/L。如果進(jìn)一步使酶④缺失,則可使黃嘌呤核苷酸積累達(dá)6g/L。
賴氨酸菌株之一是一株高絲氨酸缺陷菌株,由谷氨酸的北京棒狀桿菌ASl.299經(jīng)硫酸乙二酯誘變處理后經(jīng)篩選獲得的??芍?,由于高絲氨酸脫氫酶的基因發(fā)生突變,導(dǎo)致合成高絲氨酸的代謝途徑阻斷,消除了蘇氨酸和賴氨酸對(duì)天冬氨酸激酶的擠同反饋抑制,并使代謝流*流向賴氨酸方向,使賴氨酸產(chǎn)量大幅度提高。
(2)在次級(jí)代謝產(chǎn)物推理育種中的應(yīng)用 營(yíng)養(yǎng)缺陷型導(dǎo)致初級(jí)代謝或次級(jí)代謝途徑阻斷,因此大多數(shù)導(dǎo)致能力下降;但在初級(jí)代謝產(chǎn)物和次級(jí)代謝產(chǎn)物的分支代謝途徑中,營(yíng)養(yǎng)缺陷型切斷初級(jí)代謝支路有可能使抗生素增產(chǎn)。ELISA試劑盒
抗生素產(chǎn)生菌除了產(chǎn)生抗生素外,同時(shí)也產(chǎn)生初級(jí)代謝產(chǎn)物。當(dāng)初級(jí)代謝途徑發(fā)生營(yíng)養(yǎng)缺陷型突變時(shí),有時(shí)引起抗生素的超產(chǎn)。如四環(huán)素、制霉菌素產(chǎn)生菌的脂肪酸缺陷型可增產(chǎn)抗生素。又氯酶素產(chǎn)生菌的芳香族氨基酸營(yíng)養(yǎng)缺陷型導(dǎo)致氯霉素超產(chǎn)。
利用營(yíng)養(yǎng)缺陷型還可以產(chǎn)生新產(chǎn)品,如金霉素產(chǎn)生菌的甲硫氨酸缺陷型,可以產(chǎn)生去甲基金霉素。
一、滲漏缺陷型在推理育種中的應(yīng)用
滲漏缺陷型是一種特殊的營(yíng)養(yǎng)缺陷型.是一種遺傳性代謝障礙不*的突變型。其特點(diǎn)是酶的活力下降而不*喪失,并能在基本培養(yǎng)基上少量生長(zhǎng)。在MM上生長(zhǎng)特別慢而菌落小。既能少量地合成代謝產(chǎn)物,又不造成反饋抑制。滲偏缺陷型的優(yōu)點(diǎn)是不必添加*的缺陷營(yíng)養(yǎng)物。ELISA試劑盒
篩選方法:把大量營(yíng)養(yǎng)缺陷型菌株接種在基本培養(yǎng)基上,挑選生長(zhǎng)特別慢而菌落小的。