人elisa試劑盒批發(fā)免疫測(cè)定技術(shù)的基礎(chǔ)在于抗原抗體之間的特異結(jié)合反應(yīng),所以任何的確診試劑離不開的質(zhì)料,如抗原抗體,酶等。曾經(jīng)用于免疫測(cè)定的抗原一般為各種純化抗原,而抗體則為純化抗原免疫動(dòng)物后獲得的多克隆抗體和運(yùn)用雜交瘤技術(shù)得到的單克隆抗體,而抗原或抗體的符號(hào)物如酶標(biāo)結(jié)合物則通過各種化學(xué)合成方法制備。近年來,跟著分子生物學(xué)的展開,運(yùn)用基因工程方法制備各種特別的。
操作方法:
雙抗體夾心法:
1、包被:用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1~10μg/ml。在每個(gè)聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml,4℃
隔夜。次日,棄去孔內(nèi)溶液,用洗刷緩沖液洗3次,每次3分鐘。(簡稱洗刷,下同)。
2、加樣:加必定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃ 孵育1小時(shí)。然后洗刷。(一同做空白孔,陰性對(duì)照孔及
陽性對(duì)照孔)。
3、加酶標(biāo)抗體:于各反應(yīng)孔中,參與新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃ 孵育0.5~1小時(shí),洗刷。
4、加底物液顯色:于各反應(yīng)孔中參與暫時(shí)制作的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分鐘。
5、中止反應(yīng):于各反應(yīng)孔中參與2M硫酸0.05ml。
6、效果斷定:可于白色布景上,直接用肉眼查詢效果:反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,陽性程度越強(qiáng),陰性反應(yīng)為無色或極淺,依據(jù)所呈顏色的深淺,以“+”、“-”號(hào)標(biāo)明。也可測(cè)OD值:在ELISA檢測(cè)儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔OD值,若大于規(guī)則的陰性對(duì)照OD值的2.1倍,即為陽性。